懸浮細(xì)胞如何固定做免疫熒光等后續(xù)實驗？

懸浮細(xì)胞呈現(xiàn)懸浮狀態(tài)生長，如何固定？是所有后續(xù)實驗的第一步，也是關(guān)鍵的一步，也是難倒很多人的的一步。靶點科技懸浮細(xì)胞專用固定玻片Shi-Fix，提供全新的痛點解決方案。L-多聚賴氨酸等傳統(tǒng)老掉牙的作坊式方法被詬病，被淘汰。

您是否希望懸浮細(xì)胞的免疫熒光像貼壁細(xì)胞一樣容易？現(xiàn)在就是這樣！靶點科技Shi-Fix懸浮細(xì)胞免疫熒光專用玻片直擊痛點。

細(xì)胞免疫熒光主要用于蛋白定位研究，相互作用研究和細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)研究。細(xì)胞免疫熒光就是將免疫學(xué)方法和熒光標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合，研究特異性抗原在細(xì)胞內(nèi)的分布。細(xì)胞免疫熒光特性高，敏感性強(qiáng)，速度快，主要原理也是利用抗原抗體反映抗原抗體結(jié)合后再用熒光標(biāo)記，通過顯微鏡下觀察來確定某種特異性抗原是否存在。

根據(jù)培養(yǎng)的細(xì)胞類型，可分為貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞（淋巴細(xì)胞，血液的白細(xì)胞）。貼壁細(xì)胞有天然貼壁的屬性，而懸浮細(xì)胞不依賴支持物表面，在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長。

免疫熒光實驗的基礎(chǔ)前提就是讓細(xì)胞能固定在玻片上。懸浮細(xì)胞如何貼壁或者固定到玻片上，是業(yè)內(nèi)科研人員面對的一個難題。傳統(tǒng)上，或用細(xì)胞離心甩片機(jī)制備細(xì)胞片或直接涂片法制備細(xì)胞涂片，然后把細(xì)胞片于乙醇或丙酮或多聚甲醛固定。無論甩片還是涂片，都是黑盒子實驗。每個人操作手法不一樣，即使同一個人操作，每一批實驗，也都沒法評價細(xì)胞片上的細(xì)胞固定的情況，而這一步至關(guān)重要。盲目而又沒底的只能硬著頭皮往下做。浪費(fèi)的不僅是時間，還有抗體等很多試劑。如何解決這些痛點？懸浮細(xì)胞免疫熒光專用玻片Shi-Fix Coverslips帶來痛點解決方案！

您是否希望懸浮細(xì)胞的免疫熒光像貼壁細(xì)胞一樣容易？現(xiàn)在就是這樣！

靶點科技Shi-fix玻片允許懸浮細(xì)胞分層或直接作為單層生長。簡單，無憂的實驗方案，無需離心即可將懸浮細(xì)胞固定到載玻片上。只需將細(xì)胞添加到載玻片上，等待30分鐘，用PBS洗滌未結(jié)合的細(xì)胞并繼續(xù)免疫染色（或繼續(xù)培養(yǎng)以獲得所需的細(xì)胞密度）。

這些玻片也可用于染色懸浮細(xì)胞以進(jìn)行顯微鏡檢查，或用于固定懸浮細(xì)胞以進(jìn)行共聚焦顯微鏡檢查。更重要的是，如果需要，您還可以在細(xì)胞附著在玻片上時刺激它們。您可以像貼壁細(xì)胞一樣處理非貼壁細(xì)胞！

簡單四步法固定懸浮細(xì)胞

1. 使用 PBS 清洗細(xì)胞，并將細(xì)胞重新懸浮于 PBS 中(2-5 百萬個/ml)

2. 把懸浮細(xì)胞專用免疫熒光玻片放置于12孔或者6孔細(xì)胞培養(yǎng)板孔里，直接滴加細(xì)胞于懸浮細(xì)胞專用免疫熒光玻片上(每個玻片上 20-30 萬個細(xì)胞)

3. 使細(xì)胞附著30分鐘，有些細(xì)胞需要延長附著時間，但不要超過1小時。使用約 2ml PBS沖洗掉未結(jié)合細(xì)胞(切勿直接垂直滴加PBS到玻片上的細(xì)胞，可將 PB滴加于板孔側(cè)邊，然后輕輕搖晃 3-5分鐘)

4. 在顯微鏡下檢查細(xì)胞附著情況，如果需要進(jìn)一步培養(yǎng)，那么加入 1ml培養(yǎng)基即可;若不培養(yǎng)即可直接固定，染色。

懸浮細(xì)胞固定免疫熒光圖